生物医学工程学杂志

血管内皮生长因子与缺血性结肠炎相关性

 

缺血性结肠炎(Ischemic colitis,IC)是因肠道动脉供血不足或静脉回流受阻导致的结肠缺血性损伤性疾病,是缺血性结肠炎中最常见的临床类型[1]。IC的临床表现多种多样,早期确诊较困难,误诊率高,术后死亡率高达21%。血液检测在IC快速诊断中有重要意义[2]。在一定的时间内,组织如果没有获得充分的血液,机体为了维护自身的稳定状态,会出现一些适应性反应,现有的文献提出,缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)等与上述现象相关[3]。细胞处于缺氧状态时,泛素蛋白酶体因不断发生降解而减少,与此同时,HIF-1α 的分子浓度则会不断升高。VEGF由HIF-1α 复合物产生,其与特异性受体KDR/Flk-1结合,刺激内皮细胞增殖,从而生成血管[4-5]。本研究旨在分析缺血性结肠炎及健康人群血液和结肠组织中VEGF的表达水平,探讨VEGF在IC早期诊断中的应用价值,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月至2020年3月在我院消化内科就诊的IC患者50例为研究组,其中男23例,女27例;年龄41~88岁,平均(62.)岁;基础疾病史包括动脉硬化、高血压病、高脂血症、糖尿病、便秘、腹部手术史。诊断标准:参考2015年美国胃肠学院发表的《结肠缺血的临床指南》[6]。纳入标准[6-8]:①出现IC的临床症状,如腹痛、腹泻,便血等;②结肠镜提示肠壁缺血表现或术中发现结肠缺血、坏死;③腹部影像学结果提示,伴(或不伴)肠壁增厚、肠腔狭窄、肠管扩张、腹腔积气积液及腹部血管狭窄或闭塞等。排除标准:①感染性结肠炎、假膜性肠炎、炎症性肠病、憩室炎和结肠癌等相关疾病;②资料不完整。选取同期未患病者53例为对照组,其中男25例,女28例;年龄43~84岁,平均(63.)岁;入组前均进行结肠镜检查,并且未发现结肠病变。两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准,所有研究对象及其家属签署知情同意书。

1.2 方法

收集两组研究对象入院时血液样本1 mL,采用离心机(1000 g,10 min)分离血清,保存至-80℃冰箱内。

收集患者结肠组织匀浆,通过RNA试剂盒(RNeasy Mini Kit,Qiagen,Valencia)提取样本自身RNA[9]。采用ABI prism 7700系统(TaqMan PCR,Applied Biosystems)、Assays-on-Demand引物、探针组Hs00m1及TaqMan Assay试剂F进行RT-PCR分析,以GADPH为内参照,测定VEGF的表达水平[10]。严格按照ELISA试剂盒(Human VEGF Immunoassay Quantikine,R&D Systems,Minneapolis,USA)说明书进行操作,获得VEGF浓度标准曲线,从而检测出两组患者血清中VEGF的表达水平[11-12]。

为保证检查结果的准确性,研究组结肠镜检查时取活检标本3处,其中2处位于病变结肠黏膜,1处位于正常结肠黏膜;对照组结肠镜检查时取活检标本3处,其中2处位于降结肠黏膜,1处位于乙状结肠黏膜。将活检标本置于含有100 μL RNA稳定剂的1.5 mL Microfuge管中,置于-80℃冰箱内保存,随后对所有标本进行RT-PCR分析[13]。

研究组保守治疗为主,予全身应用广谱抗生素、禁食等,鼻饲拜阿司匹林肠溶片(Bayer Vital GmbH,批准文号:J,规格:100 mg)100 mg,1次/d,疗程为14 d。所有研究对象均不使用其他活血化瘀中药、降纤酶、抗凝剂或溶栓治疗。研究组治疗7~10 d后临床症状明显缓解,复查结肠镜显示病变结肠黏膜接近正常,同时可见瘢痕,采用上述方法收集研究组治疗后的血清及结肠组织标本进行检测分析。

1.3 统计学方法

应用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析,计量资料用()表示,采用t检验;计数资料用[n(%)]表示,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义[14]。

2 结果

2.1 两组血液中VEGF水平比较

治疗前研究组血液中VEGF水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。经过7~10 d积极治疗,研究组患者结肠组织过表达的VEGF基本恢复正常水平。

表1 两组血液中VEGF水平比较(,pg/mL)

2.2 两组VEGF RNA表达水平比较

治疗前研究组结肠组织及血液中VEGF RNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2~3。经过7~10 d积极治疗,研究组患者结肠组织区域过表达的VEGF RNA基本恢复正常水平。

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